تعیین جنسیت - تعیین جنسیت در جانداران

ساختار و کاربرد AMELX و AMELY در تعیین جنسیت گوزن مرال ایرانی (Cervus elaphus maral)

Amelogenin was first used to sex identification of cow that was reported two different patterns of amplification: classI for X chromosome with 280 bp length in female cow and class I and class II for X and Y chromosome with 280 bp and 217 bp length in male animals, respectively (Ennis and Gallagher, 1994). A total of 37 samples, included tissue, fecal and blood samples were collected from East Azerbaijan (Aynali), Qazvin (Ziyaran and Barajin), Guilan, Gorghan (Ghorogh), Semnan (Parvar) and Mazandaran naturally reserved Maral populations. CAGCCCTTCCAGGCCCAGCCCATCCAGCCACAGCCTCACCAACCCCTACAGCCCCAGTCACCTGTGCACCCCATCCAGCCCTTGCCACCCCTGCAGCCCCTGTCACCTGTGCACCCCATCCAGCCCTTGCCCCCACAGCCACCTCTGCCTCCGATATTCCCCATGCAGCCTTTGCC CCCTGTGCTTCCTGACCTGCCTCTGGAAGCTTGGCCAGCAACAGACAAGACCAAG. Amelogenin gene due to its structure and different evolution of X- and Y- chromosomes linked amelogenin, could be a reliable molecular technique in sex identification and phylogenetic study of mammalian populations. Sex determination of the wild animal populations is an effective technique to evaluate the population structure and to decide on a useful conservation management and keep the population dynamic (Shaw et al.

The Cervidae has escapable nature of life style which results in difficulty in sex determination of deer from the appearance of animal, so the amelogenin gene could be an informative marker for this manner. The sex of animals was determined by using 2% agarose gel by the following pattern: female animals: 1 band, 231 bp length and male animals: 2 bands: first, 231 bp and the second, 180 bp length (Figure 1). The phylogeny has been analyzed using Maral deer (Cervus elaphus maral), Red deer (Cervus elaphus), Sika deer (Cervus nippon), Follow deer (Dama dama) and Roe deer (Capreolus capreolus) AMELX sequences. Maral deer are a big game animal of Iran, which is suffering from decreased population size, abundance of natural habitats and illegal hunting that expose these animals to decline genetic diversity. The phylogeny has been analyzed using Maral deer (Cervus elaphus maral), Red deer (Cervus elaphus), Sika deer (Cervus nippon), Follow deer (Dama dama) and Roe deer (Capreolus capreolus) sequences.

This study has been conducted to evaluate the structure of amelogenin gene from maral deer, also to determine the sex ratio of some captive Maral deer populations of Iran using AMELX and AMELY. Cycling was carried out under the following conditions, 95 ˚C for 15 min followed by 35 cycles of 95 ˚C for 30sec, 57 ˚C for 40 s, 72 ˚C for 30 s and the final extension of 5 min at 72 ˚C. Sequences were blasted and they had 96%, 89%, 86%, 84% and 82% X homogeny and 92%, 82%, 83%, 70% and 83% Y homogeny with Red deer, Sika deer, Follow deer, Roe deer, sheep and cow, respectively. In order to compare amelogenin sequences of Maral deer and Red deer, the AMELX and AMELY sequences from Red deer were downloaded from NCBI and aligned with the same sequences of Maral deer. The application of two pairs of primers would raise the cost and also make difficulty, since the annealing temperature and PCR protocol should be the same as the SRY gene (Takahashi et al. CAGCCCTTCCAGGCCCAGCCCATCCAGCCACAGCCTCACCAACCCCTACAGCCCCAGTCACCTGTGCACCCCATCCAGCCCTTGCCACCTCTGCCTCCGATATTCCCCATGCAGCCTTTGCCCCCTGTGCTTCCTGACCTGCCTCTGGAAGCTTGGCCAGCAACAGACAAGACCAAGCGG.

 

تعیین جنسیت جنین قبل از بارداری و پیش از تولد

پیشرفت های صورت گرفته در روش های غیر تهاجمی برای تعیین جنسیت جنین با استفاده از پلاسما و سرم مادر، بر پایه‌ پیشرفت استخراج DNA از پلاسما و سرم مادر و معرفی واکنش زنجیره‌ای پلیمراز با اساس فلورسنت (real-time quantitative PCR) استوار است که حساس‌ترین روش شناسایی جنین نر با دقت 94 تا 100 درصد است. امروزه از آنجایی که خیلی از والدین موفق به انتخاب جنسیت فرزندان خود می‌شوند، شاهد عشق و علاقه‌ی بیشتر، طرد شدن کمتر و کاهش جمعیت خانواده‌ ها هستیم زیرا خیلی از خانواده‌ها فقط به علت تلاش مداوم برای داشتن فرزند دختر یا پسر، فرزندان زیادی را به دنیا می‌آورند. اما واقعیت این است که عوامل بسیاری مانند نوع رژیم غذایی خانم باردار و یا وجود عفونت های ادراری بر میزان PH و اسیدی بودن ادرار تأثیرگذارند و حتی ممکن است اگر در طول یک روز چند بار آزمایش تعیین جنسیت با جوش شیرین را انجام دهید، هر بار شاهد نتیجه ای متفاوت باشید.

     تست غیر تهاجمی پیش از تولد یا آزمایش NIPT که به آن Cell-Free Fetal DNA Testing نیز می گویند، تستی است که در آن از طریق نمونه خونی که از مادر و طی یک رگ‎گیری ساده گرفته می‌شود، مقدار جزئی DNA جنینی که در خون مادر وجود دارد، مورد بررسی قرار می گیرد. یکی دیگر از مزایای استفاده از روش های غیر تهاجمی این است که به عنوان پیش‌آزمایش می‌توان از این روش ها استفاده کرد و فقط در صورت مشکوک شدن به وجود ناهنجاری ژنتیکی در جنین، از روش های تهاجمی تر برای اطمینان استفاده کرد. میزان سختی روش های CVS و آمنیوسنتز و خطر آسیب به جنین که ممکن است منجر به سقط یا ناهنجاری ‌های مادرزادی ‌شود؛ مخصوصاً زمانی که در اوایل بارداری انجام شوند، انجام این تست‌ها را در سه‌ ماهه‌ اول بارداری محدود می کنند.

تشخیص‌های غیرتهاجمی نه تنها خطرات مرتبط با روش‌های تشخیصی تهاجمی پیش از تولد مانند آمنیوسنتز و CVS را رفع می‌کنند، بلکه اضطراب وارد شده به خانم باردار که ناشی از این روش‌ها می باشد را نیز از بین می‌برند. در روش تعیین جنسیت با جوش شیرین که بر اساس میزان PH ادرار و میزان اسیدیته آن می باشد، انتظار می رود که بعد از اضافه کردن جوش شیرین به ادرار خانم باردار در صورت جوشیدن و حباب دار شدن ادرار، جنین پسر می باشد!. یک زن سالم (در جمعیت انسانی) در بیست و سومین جفت کروموزومی خود، دو کروموزوم X  دارد (یعنی دارای الگوی XX می باشد)، در حالی که یک مرد سالم، دارای یک کروموزوم X و یک کروموزوم Y است (یعنی دارای الگوی XY می باشد).

 

تشخیص جنسیت در گونه های مختلف حیوانات

در این سن ممکن است بین دو جنس اشتباه شود و باید بسیار دقت کرد ، آلت تناسلی خرگوش نر به صورت برآمدگی گرد است ولی خرگوش ماده شبیه یک خط و در آن حین مقایسه ، برجستگی مانند حیوان نر دیده نمیشود. بصورت کلی آلت تناسلی در خرگوشهای نر به صورت لوله ای است که در موقع بیرون آمدن از سمت پشتی ۱٫۲ میلی متر از مقعد فاصله دارد و یک جفت بیضه کوچک نزدیک قسمت شکمی دیده میشود. معمولا تا اینجای کار ( قبل از ۳ ماهگی ) سخت بوده و کار تشخیص کمی دشوار که با رشد حیوان مرحله به مرحله تعیین جنسیت آسانتر خواهد شد. همانطور که در تصویر مشخص است سوراخی که نزدیک به دم ( پایین ) است مقعد و سوراخ بالایی اندام تناسلی حیوان می باشد.

اندام تناسلی در خرگوش ماده ، یک شیار شبیه خط داشته و فاصله آن از مقعد کمتر از ۱٫۲ میلی متر است. راه دوم که کمی سخت است اینه که به شاهپرهای اصلی نگاه کنی اگر بشه توی نور بهش نگاه کنید بهتر است اگر روی شاهپرها نقطه های روشن تری دیده بشه به احتمال زیاد پرنده ماده است و همینطور به پرهای زیر دم هم که نگاه کنی خطوطی افقی به صورت خطهای روشن تر دیده میشه که البته دیدن این نشانه ها در کاکتیلهای آلبینو یا لوتینو نیاز به تجربه داره ولی قابل دیدن است. راه سوم فرم سر و منقار پرند ه است که این راه هم برای افراد با تجربه است که به علت زیاد دیدن و به دفعات متعدد دیدن می تونن تفاوت فرم سر و منقار را در پرنده تشخیص بدهند ، فرم سر در پرنده نر حالت مستطیلی شکل دارد ولی در پرنده ماده انحنا به سمت دایره بیشتر میل می کند ….

در زیر رانهای آنها خلل و فرج های برجسته ای به چشم می خورد که در مجاور مخرج قرار دارند که در دوران جفت گیری مادۀ مومی شکل و بو داری از آنها خارج می شود که به وسیله آن ایگوآنای نر بر روی شاخه ها و صخره ها علامت گذاری کرده و نظر ماده ها را به سمت خود جلب می کند. در مورد نژادهای مخلوط نیز این قوانین صدق می کند در تصاویر زیر دو نژاد مخلوط نشان داده شده است در یکی که خطوط افقی زیر دم کام مشخص است و در دیگری این خطوط دیده نمی شود … این دو پرنده آلبینو نیستند بلکه یک نژاد مخلوط هستند که رنگ فیلی رنگ کم رنگی دارند. در مورد این نژادهایی که رنگ شان روشن است ، اولین راه شناسایی ، دقت به رفتار پرنده است پرنده نر بالغ بلبلی میخونه، با نوکش روی سطوح سخت ضرب میگیره و چند قدم راه میره و میپره هوا تمام اونهایی که عروس نر داشتند این رفتار را دیده اند و میشناسند.

 

منبع